细胞培养常用物品
细胞培养基
目前，市场上可提供干粉培养基和液体培养基。干粉培养基需使用者自己配制并灭菌，其优点是价格便宜。缺点是配制过程繁琐，质量不易控制。液体培养基是由专业产家按标准规模化生产，不仅质量得到保证，而且使用十分方便。常用的培养基种类及其应用见下表：
培养基种类
RPMI-1640（标准型）
DMEM-高糖（标准型）
DMEM-低糖（标准型）
IMDM
McCoys 5A
M199
F10
血清
平衡盐液体
PBS（Phosphate-Buffered Sallines）
DPBS（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Sallines）标准型
成分 含量（g/L）
CaCl2(anhyd.)(无水氯化钙) 0.10
KCl 0.20
KH2PO4 0.20
MgCl2•6H2O 0.10
NaCl 8.00
Na2HPO4•7H2O 2.16
Hanks’ 平衡盐溶液（Hanks’ Balanced Salt Solutions，HBSS）
成分 含量（g/L）
CaCl2(anhyd.)(无水氯化钙) 0.14
KCl 0.40
KH2PO4 0.06
MgCl2•6H2O 0.10
MgSO4•7H2O 0.10
NaCl 8.00
NaHCO3 0.35
Na2HPO4 0.048
D-Glucose 1.00
Phenol Red 0.01
D-Hanks’ 平衡盐溶液 (D-Hanks Balanced Salt Solutions, D-HBSS)
成分 含量（g/L）
KCl 0.40
KH2PO4 0.06
NaCl 8.00
NaHCO3 0.35
Na2HPO4 0.048
D-Glucose 1.00
Phenol Red 0.01
消化液：
分离组织和分散细胞。常用的有胰蛋白酶和二乙胺四乙酸二钠(EDTA)两种溶液。可以单独使用，也可以混合使用。
（1）胰蛋白酶溶液
胰蛋白酶（简称胰酶）是一种黄白色粉末，易潮解，应放置冷暗干燥处保存。目前应用的胰蛋白酶主要来自牛或猪的胰腺。胰酶的主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞相互离散。胰酶对细胞的分离作用与细胞的种类和细胞的特性有密切关系。一般来讲，胰酶浓度大、作用温度高、作用时间长，对细胞分离能力也大，但超过一定的限度会损伤细胞。胰酶溶液在pH8.0，温度为37℃时，作用能力最强。注意：钙离子、镁离子和血清蛋白的存在会降低胰酶活力。因此，胰酶溶液常用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks’ 平衡盐溶液配制成0.25%溶液。消化细胞时，加入一些血清或含血清的培养液，或胰蛋白酶抑制剂能终止胰蛋白酶对细胞的消化作用。
胰蛋白酶溶液配制：
（1）称取胰蛋白酶粉末置烧杯中，先用少许D-Hanks 平衡盐溶液（pH7.2 左右）调成糊状，然后再补足D-Hanks 平衡盐溶液，搅拌混匀，置室温4 小时或冰箱过夜，并不断搅拌振荡；
（2）次日，先用滤纸粗滤，再进行过滤除菌，分装入瓶中，低温冰箱保存备用，常用浓度为0.25% 或0.125%。胰蛋白酶溶液偏酸，使用前可调用碳酸氢钠溶液调pH 至7.2 左右。
保存条件：配制好的胰蛋白酶溶液必须保存在-20℃冰箱中，以免分解失效。
EDTA•4Na 溶液
EDTA 是一种化学螯合剂，对细胞有一定的离觧作用，而且毒性小，价格低廉，使用方便。常用工作液浓度为0.02%。通常与0.25%的胰蛋白酶溶液按1：1 混合使用（混合液）。注意：使用EDTA 处理细胞后，一定要用Hanks 液冲洗干净，因残留的EDTA 会影响细胞生长。
EDTA 溶液配制：用无钙、镁的D-HBSS 平衡盐溶液溶解后，高压蒸汽灭菌，分装成小瓶，室温或4℃冰箱保存。
胰蛋白酶–EDTA•4Na 溶液（0.05%胰蛋白酶, 0.53mM EDTA•4Na）
0.5g 胰蛋白酶＋0.2gEDTA•4Na＋1L D-HBSS。-20℃冰箱中保存。
pH 调整液
（1）NaHCO3溶液
常用浓度为7.5%。配制时用三蒸水溶解后，过滤除菌，分装，4℃冰箱或室温保存。当pH 值超过后，可用高压灭菌的10％醋酸溶液或通入CO2气体方法调节。
（2）HEPES（分子量238.31）溶液
HEPES 使用终浓度一般为10-50mM, 但通常配成1M 储存液：用200ml 双蒸水溶解47.6克HEPES，用1N NaOH 调节pH 至7.5-8.0;然后过滤除菌，分装小瓶，室温或4℃保存。
抗生素溶液
酚红：
大多数培养液中使用酚红作为pH 指示剂。红色表示中性pH，黄色代表酸性pH，紫色表示碱性pH。但是，在一些特殊培养液中不含酚红，因为已有一些研究表明：酚红能模拟类固醇激素（尤其是雌激素）样作用。
丙酮酸钠：
是细胞液中细胞的另一种碳源。D-葡萄糖是细胞优选碳源，但是当培养液中D-葡萄糖耗尽时，细胞可以代谢丙酮酸钠获取碳源。
抗生素
