一、编号：YQ0604

二、标题：OLYMPUS荧光显微镜操作规程

三、关键词：荧光显微镜 操作规程

四、目的：规范荧光显微镜的操作过程

五、背景知识：荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光（如365nm紫外光或420nm紫蓝光）作为激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。

六、原理：荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等）的基础上组成的。荧光光源一般采用超高压汞灯(50～200W)，它可发出各种波长的光，但每种荧光物质都有一个产生最强荧光的激发光波长，所以需加用滤光片（一般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片），仅使一定波长的激发光透过照射到标本上，而将其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后，在极短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专一性，一般都比激发光弱，为能观察到专一的荧光，在物镜后面需加阻断（或压制）滤光片。它的作用有二：一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免干扰荧光和损伤眼睛，二是选择并让特异的荧光透过，表现出专一的荧光色彩。两种滤光片必须选择配合使用。

七、仪器和材料：OLYMPUS BX60荧光显微镜，荧光染料，组织切片

八、操作步骤

1、先开电源（ON），启动发光器，再开照相机电源。以免先照相机再开荧光显微镜电源时，强大电源将照相机电子零件烧损。

2、在显微镜下找到需要的物象后，打开电脑的成像系统。需要使用荧光时，请务必预热荧光灯电源15分钟。

3、选择滤镜，将滤镜推入（以免光线向外散失）后，于暗室下开始观察。应一次把全部玻片观察完毕，勿中途切断电源，否则须待冷却后（约30分钟）才能再开电源。最少开机30分钟才可关机，以免缩短灯泡寿命。

4、荧光色素于普通光线照射下易消失，故未观察之标本宜置不透光盒内储存于冰箱（4～5℃）。而在荧光显微镜之紫外线照射下亦易使荧光消失，故照像宜速。

5、等冷却后，再将防尘罩罩上。

6、测试完毕后，请认真填写登记表格。

7、本区春夏气候潮湿，存放荧光显微镜暗室应有除湿设备，并每星期将荧光显微镜至少开机一次，以免显微镜发霉损及镜头与滤光镜。

九、注意事项

1、细心使用，避免碰撞和减少搬动。

2、镜头应用擦镜纸轻轻拂拭，对有灰尘及手印的地方，用纱布少量乙醚或无水酒精擦净。

3、禁止随意拆卸显微镜各部件。

4、保持室内清洁及适宜的温度（20℃左右）。

5、未装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤。

6、用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜。