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大鼠灌注取脑步骤

2022-06-02  点击:[]

流程:1)麻醉2)开胸3)心脏左心室穿针,剪开右心耳4)生理盐水冲水5)4%多基甲醛固定6)取脑7)保存或切片.

    1多聚甲醛的配置:

        一般方法为:4%多聚甲醛PBS缓冲液配法:称取40gPFA溶于装有500ml DEPC水的玻璃容器(烧杯或烧瓶)中,持续加热磁力搅拌至60~65℃,使成乳白色悬液.用1.0mol/L的NaOH值至7.0,使呈清亮状(滴加),再加入约500ml PBS,充分混匀(在冰浴或冷水浴中),可再检测一下pH,过滤后定容至1000ml,室温或4℃保存备用.

我们用的方法:加热至60~65℃固然融解的快,不过容易挥发,气味难闻,不是好的选者.我们是这样做的,感觉不错,在此强烈推荐:先配好pbs,称好相应的多聚甲醛,37c水浴或温箱密封放置2天,就能全溶.

    3麻醉后开胸:暴露充分些容易心脏穿刺及剪开右心耳.箭头所指为右心耳.

    4心尖插入灌注针头,剪开右心耳,开放静脉血.

    5夹闭腹主动脉:只灌注上肢及头脑,固定的好又快,又省多聚甲醛.多聚甲醛用100ml以下即可.

    6先灌注生理盐水约100ml,见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛.

    7灌注成功的标志:刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动(下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全);前肢及颈部僵硬;所灌注的脑组织白而硬.

    8分离除去后颈部肌肉.

    9用弯钳仔细剔除颅骨.

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